造血干祖细胞（hematopoietic stem progenitor cell,HSPC）存在于成体骨髓内，具有长期自我更新能力，同时能够分化为所有类型的血细胞和免疫细胞，因此在疾病治疗上具有重要的价值。人类胚胎HSPC发生过程的单细胞转录组图谱研究显示了独特的动态变化规律，但是受材料和技术的限制，人胚胎HSPC发育过程中的染色质开放状态、重要组蛋白修饰的表观遗传图谱及基因表达调控机制仍未被揭示。人多能干细胞（human pluripotent stem cell, hPSC）向造血祖细胞（hematopoietic progenitor cell,HPC）分化的体系为探究HSPC生成过程中的表观遗传调控提供了可进行实验操作的平台。

清华大学医学院那洁副教授课题组长期从事hPSC向心血管和造血谱系体外分化的研究。6月6日，该课题组在《自然•通讯》（Nature Communications）期刊上发表了题为“染色质动态变化和转录组学分析揭示了转录因子JUNB在造血祖细胞生成过程中的必要作用‎（Integrative epigenomic and transcriptomic analysis reveals the requirement of JUNB for hematopoietic fate induction）的文章。

图1. HPC体外分化过程中的基因表达调控研究

研究人员利用hPSC向HPC分阶段分化体系，纯化了血管中胚层(vascular mesoderm cells, VME)，内皮前体细胞(endothelial progenitor cell, EPC)和造血祖细胞(HPC)，分别获得了各分化阶段的转录组、开放染色质、H3K4me3和H3K27me3组蛋白修饰的数据。通过对数据进行整合分析，研究人员根据开放染色质图谱推断了各阶段可能行使功能的转录因子，揭示了组蛋白二价修饰(bivalent)的动态变化以及标志性基因的表观遗传修饰模式。

HSPC来自一群特殊的内皮细胞-生血内皮细胞（hemogenic endothelial cell, HEC）。HEC的特性直接影响HSPC的生成效率和是否具有移植重建能力。研究者采用单细胞转录组和染色质开放检测技术，鉴定了体外分化产生的HEC群体，并将其与体内发育的HEC进行了转录组差异比较。结果发现，体外生成的HEC虽具有较强的增殖能力，但其动脉内皮基因表达明显不足。而HEC的动脉内皮特征对HSPC的生成和功能具有关键作用，因此，在体外分化体系中，增强HEC的动脉内皮特征可能有助于提高HPC的分化潜能。

之后，基于ATAC-seq转录因子富集分析和组蛋白修饰动态变化的结果，研究者发现在hPSC向HPC分化过程中，转录因子JUNB的基因表达动态变化以及在基因组上的结合特征与调控因子MYB和RUNX1等重要造血调控转录因子类似。研究者采用JUNB基因敲除的hPSC分化HPC，发现JUNB基因的缺失显著抑制了HEC和HPC的生成，JUNB因子回补实验进一步证明了转录因子JUNB在HPC分化过程中的重要作用。从机制上讲，转录因子JUNB的存在使得调控因子ERG、GATA2和RUNX1等造血谱系相关因子的染色质呈现开放状态，促进HEC的特化和向HPC的转变；另外，JUNB因子可以直接结合调控因子RUNX1和CD44等内皮-造血转变（endothelial-to-hematopoietic transition, EHT）基因的启动子区域，调控基因表达和EHT过程的发生。因而转录因子JUNB是hPSC分化HPC过程中的一个必要因子。

这项研究揭示了人类HPC分化过程中的表观遗传调控机制，发现了HEC和HPC生成过程中新的调控因子JUNB。同时，体内外HEC群体单细胞转录组对比分析为在体外更高效地获取高质量的HPC提供了重要的线索。

清华大学医学院那洁副教授为该论文通讯作者。清华大学医学院博士后陈霞、医学院2019级博士生王佩亮和生命学院2016级博士生邱辉为本文共同第一作者。本研究获得国家干细胞及转化研究重点专项、国家自然科学基金委、清华大学春风基金、清华-北京大学联合生命科学中心的大力支持。